碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(微量酶标法)
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 19:02 

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(微量酶标法)
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货号: WLA064b
保存条件: 4℃避光
规格: 96T
产品名称:碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(微量酶标法)

产品概述:碱性磷酸酶ALP几乎存在于身体各种组织中,是膜结合酶。肠上皮、肾小管、成骨细胞、肝脏、胎盘及白细胞中尤其丰富。血清中AKP主要来源于肝和骨。AKP与肠内脂质转移及骨质钙化有关。血清AKP测定对肝胆系统及骨骼系统疾病的研究有参考意义。
本试剂盒可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等。
保存日期:本试剂盒自订购之日起6月内有效。
 
操作流程:
一、样本前处理:
1. 血清(浆):可直接取样用于测定(个别含量过高的样本需要稀释后测定,如鸡血清(浆)中ALP活力 较高,一般需要用生理盐水5倍或10倍稀释后待测)。
2. 组织:准确称取待测组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水进行匀浆,2500rpm,离心10min,取上清液进行测定。
3. 细胞培养液:吸取细胞培养液,1000-1500rpm,离心10min,取上清液进行测定。
4. 培养细胞:
a. 培养细胞的收集:
悬浮培养细胞:可直接通过离心收集沉淀细胞(1000rpm,离心10min,弃上清留沉淀细胞)。
贴壁培养的细胞:吸去上清,可通过细胞刮直接将细胞刮下,然后1000rpm,离心10min弃上清, 留沉淀细胞,再加入1mlPBS轻轻吹打,再次1000rpm,离心10min弃上清,留沉淀细胞待用。
b. 培养细胞的破碎:在细胞沉淀中加入一定量(108 的细胞一般加0.3-0.5ml)的缓冲液(缓冲液可以用 PBS或者是生理盐水),需保证超声探头在液面以下。功率300W,冰水浴,每3-5s超声一次,间隔4次 (每次间隔时间为30s左右)

二、测定过程参考操作表如下:
试剂名称 空白孔 标准孔 测定孔
双蒸水(μl) 5    
0.1mg/ml酚标准工作液(μl)   5  
待测样本(μl)     5
缓冲液(μl) 50 50 50
基质液(μl) 50 50 50
充分混匀,37℃水浴,15min
显色剂(μl) 150 150 150
轻轻振摇孔板混匀,波长520nm,酶标仪测定各孔吸光度OD值。

三、计算公式
1. 血清(浆)中ALP活力计算公式:
单位定义:100ml 血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
血清中ALP活力 (金氏单位/100ml) =测定OD值 - 空白OD值/ 标准OD值 - 空白OD值x酚标准品浓度 (0.1mg/ml)x 100mlx 样本测定前稀释倍数
2. 组织样本中ALP活力计算公式:
单位定义:每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
组织中ALP活力 (金氏单位/gprot)= 测定OD值 - 空白OD值/ 标准OD值 - 空白OD值x酚标准品浓度 (0.1mg/ml)÷待测样本蛋白浓度 (gprot/ml)
3. 培养液中ALP活力计算公式:
单位定义:100ml 液体在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
培养液中ALP活力 (金氏单位/100ml)=测定OD值 - 空白OD值 /标准OD值 - 空白OD值x 酚标准品浓度 (0.02mg/ml)x 100ml x样本测定前稀释倍数
4. 培养细胞ALP活力计算公式:
单位定义:每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位
培养细胞中ALP活力 (金氏单位/gprot) =测定OD值 - 空白OD值 /标准OD值 - 空白OD值x 酚标准品浓度 (0.02mg/ml)÷待测样本蛋白浓度 (gprot/ml)
 
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温馨提示:不可用于临床治疗。
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