乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(微量酶标法)
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 19:02 

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(微量酶标法)
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货号: WLA072b
保存条件: 4℃避光及-20℃及4℃
规格: 96T
万类生物试剂促销:抗体5折,部分试剂盒8折。

产品名称:乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(微量酶标法)(试用装10T

产品概述:乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase , LDH)是一种稳定的蛋白质,存在于正常细胞的胞质中,一旦细胞膜受损 ,LDH即被释放到细胞外,通过检测细胞培养上清中LDH活性,可判断细胞受损程度,在一些应用中,比如药物筛选时,需要进行特定物质细胞毒性检测。LDH能催化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙 , 在碱性溶液中呈棕红色 , 通过比色可出酶活力。
本试剂盒可测各种组织、血清(浆)及培养细胞、培养上清液、脑脊液等样本中LDH活性。

包装信息:
试剂名称 WLA072a(48T) WLa72b(96T) 保存条件
基质缓冲液 3ml 5ml 4℃
辅酶 I 粉剂×1 粉剂×1 -20℃
2,4-二硝基苯肼 3ml 5ml 4℃,避光
4mol/L NaOH 溶液 3ml 5ml 4℃
2μmol/mol 丙酮酸钠标准液 1ml 1ml 4℃

保存日期:本试剂盒自粉剂溶解之日起3月内有效。
 
操作流程:
1. 试剂配制 : 
(1)辅酶Ⅰ应用液的配制:每支粉剂加1.3ml双蒸水溶解,溶解后即为10x辅酶Ⅰ储备液,如需多次使用建议分装 冷冻,防止反复冻融。测定时将10x辅酶Ⅰ储备液用双蒸水10倍稀释 , 用多少配多少 , 现用现配。
(2)0.4mol/L NaOH 溶液配制 : 将4mol/L NaOH 溶液用双蒸水10倍稀释 , 用多少配多少 , 现用现配。
(3)0.2μmol/mL丙酮酸钠标准应用液配制:取2μmol/mL丙酮酸钠标准液用双蒸水10倍稀释 , 现用现配。
 2. 参考取样量: 0.01%小鼠脑组织匀浆取5-20μL(根据样本活力高低确定取样量),人血清10倍稀释取10-30μL(根据样本活力高 低确定取样量), 细胞用1%Triton X-100裂解 , 细胞培养基可直接用于测定。若样本中LDH酶活力太高,可将样本用 生理盐水稀释后再测。
3. 操作表:
试剂名称 空白孔 标准孔 测定孔 对照孔
双蒸水(μl) 25 5   5
0.2μmol/ml 标准液(μl)   20    
待测样本(μl)     20 20
基质缓冲液(μl) 25 25 25 25
辅酶Ⅰ应用液(μl)     5  
充分混匀,37℃水浴,15min
2,4-二硝基苯肼(μl) 25 25 25 25
充分混匀,37℃水浴,15min
0.4mol/L NaOH 溶液(μl) 250 250 250 250
混匀,室温放置 5 min,波长450nm , 酶标仪测定吸光度。
4. 计算公式:
(1)血清(浆)LDH计算公式:  
   单位定义:1000ml 血清(浆)37℃与基质作用15min,在反应体系中产生1μmol丙酮酸为1单位
   血清(浆)中LDH 活性 (U/L)=测定OD值-对照OD值 /标准OD值-空白OD值x标准品浓度 (0.2μmol/ml)x 1000
(2)组织LDH活力计算公式: 
   单位定义:每克组织蛋白37℃与基质作用15min,在反应体系中产生1μmol丙酮酸为1单位。
   组织中LDH活性 (U/gprot)=测定OD值-对照OD值/ 标准OD值-空白OD值x标准品浓度 (0.2μmol/ml)÷ 匀浆蛋白浓度 (gprot/ml)
(3)细胞LDH活力计算公式:
细胞活力用LDH释放率来表示,后者值越大,表示细胞活力越差,受损程度越严重。
450nm波长处读取细胞裂解液和细胞培养基孔的吸光度值,根据标准曲线算出酶活力单位,即为测定的酶活力单位。
细胞LDH释放率(%)=细胞培养基中测定的酶活力单位/(细胞裂解液测定的酶活力单位+细胞培养基测定的酶活力单位)× 100%
 
附标准曲线制备
1. 前处理: 将2μmol/ml的丙酮酸钠标准品用双蒸水分别200倍、100倍、50倍、20倍、10倍、5倍、2倍稀释后按照操作表制作标准曲线。
2. 操作表:
试剂名称 空白孔 标准孔
双蒸水(μl) 25 5
不同浓度丙酮酸钠标准液(μl)   20
基质缓冲液(μl) 25 25
充分混匀,37℃水浴,15min
2,4-二硝基苯肼(μl) 25 25
充分混匀,37℃水浴,15min
0.4mol/L NaOH 溶液(μl) 250 250
混匀,室温放置 5 min,波长450nm , 酶标仪测定吸光度。
丙酮酸钠浓度(μmol/ml) 0.01    0.02    0.04    0.1     0.2     0.4     1
相当于LDH单位 10 20 40 100 200 400 1000
以所测得的吸光度为纵坐标,以相应的单位为横坐标,绘制标准曲线。 

详情请致电咨询:400-602-0407(转2号键)或登录公司官网 
www.wanleibio.cn

 
温馨提示:不可用于临床治疗。
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