SiHa
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 18:36 

SiHa
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货号: WLC0013
规格: T25/冻存
产品名称:SiHa

基本信息:该产品为人子宫颈癌细胞, 上皮样贴壁生长,89%高糖DMEM+10%FBS+1%双抗,37℃,5%CO2培养箱中培养,湿度保持在70%-80%,可按1:4-1:10比例进行传代,冻存条件为90%FBS+ 210%DMSO于液氮中保存。本品具有潜在的生物安全性,必须在二级生物安全台内操作,并做好防护措施,所有废液及器具需灭菌后方能丢弃。本产品支原体检测结果为阴性。

包装信息:
细胞名称   SiHa(人子宫颈癌细胞)
货    号   WLC0013
规    格    T25培养瓶(密度80%-90%)或2ml冻存管(1ml细胞悬液)

注意事项:
1. 收到细胞后,若为培养瓶,请对细胞培养瓶外表面进行消毒,建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度进行换液或传代。
2. 若为冻存管,请将冻存管放于液氮中,过夜后进行复苏培养,或直接复苏。
3. 收到细胞后请尽快更换为新鲜的完全培养基,不建议使用原瓶中培养基。


细胞传代:
1.严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出原培养瓶中的培养基(严禁直接倾倒),PBS缓冲液润洗细胞两次,T25瓶中加1-2ml 0.25% EDTA的胰酶室温或37℃进行消化(注意摇动培养瓶使胰酶均匀铺满瓶底,并严格把握消化时间)。
2.镜下观察消化情况,当细胞边缘缩小,细胞变圆时去掉胰酶(若消化到细胞漂浮可能会影响细胞活力),加6-8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞,尽量把细胞吹落、吹散。
3.收集细胞至无菌离心管中,800-1000rpm离心3-5min,弃上清,重新加入新鲜培养基混匀细胞,转移至2个(1:2)或3个(1:3)培养皿/瓶中,放于培养箱中培养完成传代。也可不经离心,直接取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基于培养箱中培养。

注意培养基PH值变化,定期换液,待细胞密度约80%或以上时重复传代操作或冻存。

常见问题:

1. 培养瓶有破裂,导致漏液:可能会引起细胞的污染,建议随时观察状态并及时反馈。
2. 贴壁细胞细胞漂浮:收到细胞时细胞漂浮或部分漂浮,若放置4小时后大部分细胞又贴壁,表明细胞活力正常,可将漂浮细胞去掉,留过滤后的原培养基或新配制的完全培养基继续培养,待细胞密度约80%以上,进行传代等操作。若放置4小时后细胞仍不贴壁,请将漂浮细胞及胰酶消化后的贴壁细胞收集至离心管中,800-1000rpm离心3-5min,弃上清,重新加入过滤后的原培养基或新鲜培养基继续培养。
3. 贴壁细胞生长缓慢:适当提高血清浓度(建议不超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养皿/瓶继续培养。
4. 生长不均:贴壁细胞若出现生长不均,成岛状生长,可将细胞消化离心,重新吹散细胞,加入新鲜培养基继续培养。




 
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